BRADFORD 500 ML

Reagente Bradford Scienco-Biotech – Quantificação de proteínas
 

Descrição do produto

O reagente Bradford da Scienco Biotech é ideal para determinação da concentração de proteínas de maneira simples e precisa em uma solução. O procedimento é baseado na formação de um complexo entre o corante Azul de Comassie e moléculas proteicas presentes no ensaio.  Encontra-se pronto para uso, não sendo necessária nenhuma preparação ou diluição adicional. O tempo de incubação com o reagente é rápido, apenas 5 minutos e a amostra pode ser mensurada a 595 nm em espectrofotômetros. A quantificação com Reagente Bradford Scienco Biotech pode ser desenvolvida em ensaios de quantificação realizados em cuvetas ou escalonados a microplacas. A quantidade de absorção é proporcional a quantidade de proteínas presentes. O intervalo linear deste ensaio utilizando BSA (bovine serum albumin) como proteína padrão é 125-1000 μg/ml de proteína para ensaios padrão e 1.25–10 µg/ml para microensaios.

Características do Produto

A presença de açúcares ou outras substâncias redutoras junto com tióis não interferem com este reagente. Açúcares redutores são frequentemente utilizados para estabilizar as proteínas em solução. Outros métodos tradicionais sofrem interferência da presença destes compostos (BCA e Lowry). No entanto, o reagente Bradford da Scienco Biotech é compatível com baixas concentrações de detergente. Rotineiramente ensaios para quantificação de proteínas com emprego do reagente Bradford, são realizados em temperatura ambiente. O desenvolvimento da cor ocorre imediatamente. A absorbância da proteína é mensurada a 595nm, registrada e sua concentração é determinada em comparação com uma curva-padrão. Microensaios são aplicados para soluções em baixas concentrações de proteínas.

Precauções e Isenção

Este produto é apenas para uso em pesquisa. Não deve ser aplicado para fins diagnósticos, domésticos, farmacêuticos ou em outras áreas. Por favor, consulte a Ficha Técnica de Segurança para informações sobre perigos e práticas seguras de manipulação de químicos.

Armazenamento e Estabilidade

Condição de transporte: gelo gel

Após o recebimento do reagente Bradford Scienco-Biotech recomenda-se seu armazenamento imediato a 4 - 8°C. O produto possui estabilidade de no mínimo 12 meses a 4°C.

Procedimento de uso

Para ensaio padrão: Realize diluições com proteínas padrão, normalmente BSA. Concentrações dos respectivos padrões que devem ser preparados com BSA: 0, 250, 500, 750 e 1500 μg/mL. Remova o reagente do estoque a 4°C e equilibre sua temperatura em temperatura ambiente (25°C). Homogenize o reagente antes do uso. Após preparação dos tubos com as concentrações de BSA conhecidas e corretamente identificadas (0, 250, 500, 750 e 1500 μg/mL), adicione 10 μL de cada uma das  soluções acima a um novo tubo respectivo. Adicione 0,5 mL de Bradford a cada tubo e misture por inversão. Incube a solução em temperatura ambiente por pelo menos 5 minutos e tempo máximo de 1 hora. Mensure a absorbância em espectrofotômetro a 595nm.

Para microassay: O intervalo linear destes ensaios para BSA é 1.25–10 µg/ml. 1.  Remova o reagente do estoque a 4 ° C deixe equilibrar até chegar em temperatura ambiente (25°C). Homogenize o reagente algumas vezes antes do uso. Prepare tubos com concentrações conhecidas de BSA: 0, 2.5, 5 , 7.5 e 10 μg / mL.  Transfira 0,5 mL de cada uma dessas soluções acima a, um novo tubo corretamente identificado. Após a transferência, aplique 0,5mL do reagente Bradfor Scienco-Biotech e misture por inversão. Incube a solução em temperatura ambiente por pelo menos 5 minutos e tempo máximo de 1 hora. Mensure a absorbância em espectrofotômetro a 595nm.
 

Rendimento

O reagente Bradford da Scienco Biotech possui frascos de 250 mL e 500 mL ou volumes que podem ser customizados conforme as necessidades de sua aplicação. Para volumes de 2,5 mL utilizados na metodologia padrão de detecção, frascos de 500 mL possuem rendimento para execução de pelo menos 160 ensaios.

Referência

Bradford, MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72:248-54, 1976.